西宝生物科技(上海)股份有限公司

摘自《体检人群幽门螺杆菌血清学检测专家共识》

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)是一种革兰氏阴性杆菌，是危害人类健康最常见的病原体之一。1994年，世界卫生组织(WHO)将Hp定义为Ⅰ类致癌因子。2021年，美国公共卫生机构将Hp列为新增的致癌物，进一步引起我国公众对Hp感染的重视，随之增加了在健康体检中检测Hp的意向。此外，Hp感染还与慢性胃炎、消化性溃疡、黏膜相关淋巴组织(mucosaassociated lymphoid tissue, MALT)淋巴瘤等疾病的发生密切相关。我国人群的Hp感染率仍然维持高位(～50%)，多数感染者并无明显消化道症状或相关并发症，类似“健康带菌状态”，实际上感染者的胃黏膜可能已经发生慢性炎症，甚至出现萎缩、肠化等癌前状态。

按照我国新版的《第六次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告》，对于Hp的诊断方法推荐尿素呼气试验、单克隆粪便抗原试验和血清学检测方法。国际Hp马斯特里赫特Ⅳ共识亦指出，血清学检测方法是一个不受胃内细菌定植状况影响的检测方法，尤其在胃内Hp细菌数量少的时候，其他检测方法会出现假阴性，而血液中针对Hp抗原、特别是CagA等特异性抗原的抗体水平相对稳定，不受感染程度和治疗的影响，更易于检测。

Hp马斯特里赫特Ⅴ共识亦强调，经过当地验证高度准确的血清学试验可用于非侵入性Hp感染诊断。Hp的CagA和VacA蛋白是重要致病因子，检测血清抗CagA、VacA抗体，可以评价Hp菌株的毒力水平。

Hp血清学检测具有操作简单、适用范围广、成本效益高等优势，常用于Hp流行病学调查研究。随着人们对Hp认识的不断深入，Hp毒力分型检测已被广泛应用于体检人群，尤其是处于胃癌高发地区、有胃癌家族史及40岁以上的体检人群。通过对Hp分型检测，有助于判定感染Hp的不同毒力水平，在体检人群中发现CagA和VacA阳性Hp感染的高风险人群意义重大，可以促进对于该类人群Hp感染的早诊早治，进而降低Hp相关消化道疾病特别是胃癌的发生率。

Hp毒力因子CagA和VacA抗体检测 Hp致病基于其可以产生多种毒力因子，随着Hp致病机理研究的进展，新的毒力因子不断被发现。大量的研究结果表明，在目前众多Hp的毒力因子中，CagA和VacA最具临床指导意义。《中国幽门螺杆菌根除与胃癌防控的专家共识意见》指出，CagA和VacA是Hp最为重要的毒力因子。根据是否表达CagA和(或)VacA这两种毒力因子可将Hp分为Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型Hp菌株CagA和/或VacA蛋白表达阳性，为致病性较强的产细胞毒素菌株，Ⅱ型Hp菌株CagA和VacA蛋白均不表达，为不产生主要毒力因子的菌株。

鉴于Hp的UreA(尿素酶 A)、UreB(尿素酶B)、CagA和VacA蛋白等Hp结构成分或毒力蛋白，被Hp分泌产生后可以刺激机体免疫系统产生相应的血清抗体，借助血清Hp相关抗体可以反映受检者的Hp感染情况，从而实现对Hp的毒力分型。

西宝生物开发的高质量幽门螺旋杆菌(CagA)重组抗原，可应用于体外诊断幽门螺杆菌抗体IgG/IgM检测试剂盒开发，适用于化学发光等多种应用场景，助力肠道研究防控无“幽”。

针对细胞毒素相关蛋白A(CagA)的检测，西宝生物推出1种CagA抗原及鼠抗人IgG单抗。具体配对方式如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）。

组合1：HP CagA抗原（货号：EDD0033C）包被羧基磁珠+鼠抗人IgG单抗（货号：EKN0255B）标记吖啶酯；

组合2：HP CagA抗原（货号：EDD0033C）包被羧基磁珠+HP CagA抗原（货号：EDD0033C）标记碱性磷酸酶；

选取NMPA获证试剂为参考系统。对西宝生物（AE）与参考系统的CagA测值结果分别根据其参考值（西宝生物（AE）：COI≥1为阳性，COI＜1为阴性；参考系统：≥6为阳性，＜6为阴性）进行阴阳性判定，并对判定结果进行四格表分析，结果如下：

灵敏度：24/29×100%=82.8%

特异性：47/50×100%=94%

符合率：（24+47）/79×100%=91.1%

图1为AE平台检测临床样本发光值分布，CagA阴性组发光值均值与CagA阳性组发光值均值能够明显区分。由表1数据可得，3例假阳性样本及5例假阴样本均落在参考系统的cutoff附近，属于灰区，需要用第三方试剂进行确认。西宝生物AE组合与参考系统的灵敏度大于80%，特异性及符合率大于90%，说明两种试剂的临床符合率较高。

选取NMPA获证试剂为参考系统。对西宝生物（AP）与参考系统的CagA测值结果分别根据其参考值（西宝生物（AP）：COI≥1为阳性，COI＜1为阴性；参考系统：≥6为阳性，＜6为阴性）进行阴阳性判定，并对判定结果进行四格表分析，结果如下：

灵敏度：25/29×100%=86.2%

特异性：47/50×100%=94%

符合率：（25+47）/79×100%=91.1%

图2为AP平台检测临床样本发光值分布，CagA阴性组发光值均值与CagA阳性组发光值均值能够明显区分。由表2数据可得，3例假阳性样本及4例假阴样本均落在参考系统的cutoff附近，属于灰区，需要用第三方试剂进行确认。西宝生物AP组合与参考系统的灵敏度大于85%，特异性及符合率大于90%，说明两种试剂的临床符合率较高。

样本:样品加样量10ul；

试剂1：HP CagA抗原（货号：EDD0033C）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：鼠抗人IgG单抗（货号：EKN0255B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：10ul样本+50ul试剂1混合，37℃孵育5min，清洗；

第二步：加入50ul试剂2，37℃孵育5min，清洗；

第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。

样本:样品加样量10ul；

试剂1：HP CagA抗原（货号：EDD0033C）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：HP CagA抗原（货号：EDD0033C）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：10u样本+50ul试剂1+50ul试剂2+混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，进行测试。

测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。