工艺培养过程中分析细胞结团的原因来自两方面:
1 动物细胞本身可能存在固有的细胞结团现象,如CHOS细胞;
2 动物细胞在遇到不良的营养条件和环境,也容易发生细胞聚集现象,以及培养基中Ca2+等离子的浓度也会影响细胞黏附[1]。
- 氧气供应不足
- 代谢废物积累
- 营养物不足等
- 细胞死亡
抗细胞结团常采用的物质是多硫酸化合物,例如:肝素钠、硫酸乙酰肝素、苏拉明和硫酸葡聚糖。在多种多硫酸盐化合物中,硫酸葡聚糖是在CHO细胞悬浮培养中应用最广泛的抗结团剂。
葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium salt,DSS)是葡聚糖的聚阴离子衍生物,由葡聚糖和氯石黄酸的酯化反应形成,以钠盐形式提供,并通过添加少量磷酸盐进行稳定。
2016年,科学家研究了硫酸葡聚糖的三种不同分子量(4000Da、15000Da和40000Da,其对应的S比例分别为3-6%、17-19%和15-19%),以及不同浓度(0.1-1.0g/L)对两种不同重组CHO细胞(CHO-K1细胞和DG44细胞)的生长和单克隆抗体产量影响。并同时评估添加硫酸葡聚糖对单抗的关键质量属性(如聚体、电荷变化和N-糖基化等)的影响。
前期研究发现,采用200000Da的硫酸葡聚糖,无论使用哪种浓度(0.1-1.0g/L),都会使最大活细胞密度和抗体浓度降低20-30%。说明采用200000Da的硫酸葡聚糖对细胞来说是有害。添加上述不同分子量不同浓度的硫酸葡聚糖对于CHOK1细胞,可以显著维持培养后期细胞密度和活力,需要注意的是最终抗体表达并未对应提高。
而对于DG44细胞添加硫酸葡聚糖,尤其是40,000Da分子量对于DG44细胞,细胞聚集会大大降低。并且显著提高了抗体产物浓度。
另外通过硫酸葡聚糖对抗体质量属性的影响研究表明对于DG44细胞添加4000Da和15000 Da硫酸葡聚糖对单克隆抗体的电荷异构体无影响(P<0.05),只有添加40,000Da硫酸葡聚糖才显著降低碱性电荷异构体(P<0.05)[1];
添加硫酸葡聚糖对单克隆抗体的质量属性(聚体、电荷异构体和N -糖基化)没有负面影响,甚至可以对部分质量属性产生积极影响,如影响单克隆抗体的电荷异构体,降低碱峰。
总之,对于细胞生长、抗体产量和质量的影响取决于硫酸葡聚糖的分子量、浓度和CHO细胞系的选择。因此,针对不同CHO细胞系,建议优化最佳的硫酸葡聚糖的分子量和浓度,以最大发挥硫酸葡聚糖在单克隆抗体生产中的有益作用。[1]
目前也有很多用硫酸葡聚糖钠盐,Mw 5,000 ,平均分子量约5 kD,可通过改变细胞表面的电荷,来促使单个细胞悬浮,防止细胞结团,支持细胞高密度培养,提高细胞活力。
总硫含量 | 15~20% |
硫酸根含量 | ≤0.2% |
热失重(105℃,2h) | ≤10.0% |
pH | 5.0~7.5 |
旋光度 | +75°~ +105° |
铁离子 | ≤2.0% |
氯离子含量 | ≤1000ppm |
外观 | 白色~淡黄色粉末 |
微生物限度 | 需氧菌<10^5 cfu/g |
霉菌、酵母菌总数 | <100cfu/g |
内毒素 | <5EU/g |
1、 性能优良:纯度高,含硫量15~20%;
2、 稳定性高:聚阴离子复合物,可溶于水,形成无色溶液,形似天然粘多糖;
3、 内毒素低:低于5EU/g,对细胞伤害较小。
货号 | 产品名称 | 级别 |
DCJ0018D | 硫酸葡聚糖5000 | 细胞培养级 |
DCJ1606D | 硫酸葡聚糖40000 | 细胞培养级 |
葡聚糖硫酸钠 | 肠炎模型 | 分子生物学 | 抗病毒 | 抗凝血剂 | 抗血脂剂 | 化妆品研发 |
6000-8000 | √ | √ | √ | |||
8000(平均) | √ | √ | √ | |||
36000-50000 | √ | √ | √ | |||
400000-600000 | √ | √ | √ | |||
1400000(平均) | √ | √ |
货号 | 产品名称 | 平均分子量 | 包装 |
DCJ0083A | 硫酸葡聚糖钠(DSS) | Mw 3,000 | 100g,500g,5Kg,25Kg |
DCJ0018A | Mw 5,000 | 100g,500g,5Kg,25Kg | |
1840080 | Mw 8,000 | 100g,500g,5Kg,25Kg | |
ACJ1516E | Mw 15,000 | 100g,500g,5Kg,25Kg | |
DCJ1606A | Mw 40,000 | 100g,500g,5Kg,25Kg | |
DCJ0105A | Mw 36,000~50,000 | 50g,100g | |
>DCJ0016A | Mw 500,000 | 100g,500g,5Kg,25Kg |
西宝生物可以提供各种规格的硫酸葡聚糖钠,平均分子量从3,000~500,000,欢迎致电400-021-8158.