质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase
赖氨酰肽链内切酶（Lysyl Endopeptidase）初期由Masaki等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切除赖氨酸残基C末端和S-氨乙基半胱氨酸残基的肽键，用于蛋白测序和Lys-X 化合物的酶催化合成。作为Wako官方授权分销商，西宝生物专业提供Wako多种级别赖氨酰肽链内切酶，该酶稳定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小时之后，仍然拥有完整的生物活性。订购热线：400-021-8158
质谱级赖氨酰肽链内切酶是质谱分析前处理时常用的蛋白分解酶。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸基团的多肽，增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装，是方便使用的冷冻干燥品。
质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 理化特性
表1赖氨酰肽链内切酶理化特性表
| 外观 | 冻干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl buffer，pH 8） | 活性 | 0.03~0.07AU/vial |
| 分子量 | 27,000（凝胶过滤）；30,000 (SDS-PAGE) | 溶解性 | 易溶于水或缓冲液 |
| 较佳pH | 9.0-9.5（酰胺酶的较佳活性pH） | 等电点 | 6.9-7.0 |
| 抑制剂 | DFP、PMSF、TLCK | 来源 | 细菌 |
| 稳定性 | 溶于pH 值5.0-12.0 的Tris缓冲液中，可于4℃稳定保存2年。溶于pH 值6.0-11.0 的缓冲液中，可于30℃稳定保存，但是50℃及以上不稳定。 | ||
| 单位定义 | 一单位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 时每分钟产生1 μmol p-Nitroaniline所需的酶量。 | ||
| 底物特异性 | 水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA | ||
| 非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA | |||
质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 产品特点
质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 应用实例
分别采用胰蛋白酶(Tp)、赖氨酰肽链内切酶(Lep) 和Tp 与Lep联用进行胶内酶切的效果比较：牛血清蛋白BSA 的条带(100ng) 通过SDS-PAGE 获得，然后分别用Tp、Lep 和Lep+Tp 进行酶切，再用MALDI-TOFMS 法进行分析。蛋白酶的实验效果如下表：
表2 Tp、Lep 和 Lep+Tp 的蛋白酶酶切结果对照
| Tp | Lep | Lep +Tp | |
| 裂解位点 | 精氨酸和赖氨酸的C端 | 赖氨酸的C端 | 精氨酸和赖氨酸的C端 |
|
错误裂解率
(错误裂解所占比例)
|
多(8%) | 很少(0%) | 少(3%) |
| 鉴定出的多肽数量 | 17 | 19 | 22 |
结果表明 Lep 酶解的错误裂解率低，Tp酶解时加入Lep后，错误裂解率有所降低，同时，可以鉴定出更多的多肽。
图1 胰蛋白酶 (Tp)(图 a) 和赖氨酰肽链内切酶 (Lep)+Tp (图 b) 酶切后的质谱结果对照图。
Lep+Tp酶切后，可以在m/z=2000时得到吸收峰，而单独的Tp酶切在m/z=2000时没有吸收峰。该结果表明Lep可以提高测序覆盖度。
( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Y. Wada博士提供 )
质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 产品列表
| 品牌 | 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| Wako | 121-05063 |
Lysyl Endopeptidase, MS Grade 赖氨酰肽链内切酶，MS级 |
20μg | 质谱级 |
| Wako | 125-05061 |
Lysyl Endopeptidase, MS Grade 赖氨酰肽链内切酶，MS级 |
20μgx5 | 质谱级 |
| Wako | 125-02543 |
Lysyl Endopeptidase (R) 赖氨酰肽链内切酶 |
1vial(2AU) | for Biochemistry |
| Wako | 129-02541 |
Lysyl Endopeptidase (R) 赖氨酰肽链内切酶 |
1vial(10AU) | for Biochemistry |
质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 参考文献
- Wada, Y., and Kadoya, M.: J. Mass Spectrom., 38, 117 (2003).
- Shevchenko, A., Wilm, MM., Vorm, O., and Mann., M.: Anal. Chem., 68, 850 (1996).
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