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西宝生物科技(上海)股份有限公司

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Cisbio-HTRF筛选技术——高通量药物筛选必备神器
发布时间：2019-06-26        浏览次数：454        返回列表
Cisbio成立于1974年，总部位于法国Codolet，专为生命科学和诊断市场开发、生产和销售高质量试剂和试剂盒。与市场上现有的传统分析方法相比，Cisbio所开发的方法能够为使用者提供更灵敏的定量免疫分析。其中包括各种经过验证的药物发现筛选试剂和高通量分析试剂盒，以及仅用于体外诊断试剂盒。

具体而言，Cisbio领先的HTRF® 筛选技术（均相时间分辨荧光技术）是目前最为快捷方便的检测方法。西宝生物课提供Cisbio HTRF®相关检测试剂盒，货期稳定！产品线齐全！咨询订购热线：400-021-8158！


HTRF 原理
HTRF技术基于时间分辨荧光（TRF）和荧光共振能量转移（FRET）两大技术原理
时间分辨荧光（TRF）
TRF利用稀土元素中镧系元素的独特性质,与普通荧光的主要区别是荧光的持续时间不同。普通荧光的半衰期为纳秒级，镧系元素的半衰期是毫秒级，有6个数量级的差别。所以，在检测时，TRF有一个时间延迟---50微秒。经过这个时间延迟，普通荧光的信号几乎为零。所以，TRF的背景非常低，反映样品的实际情况。
荧光共振能量转移（FRET）
FRET技术利用了两种荧光基团的能量转移，这两种荧光基团分别称为能量供体（Donor）和能量受体（Acceptor）。Donor 被外来光源激发（例如氙灯或激光），如果它与Acceptor 比较接近，可以将能量共振转移到Acceptor上，使其受到激发，发出特定波长的发射光。将 Donor 和 Acceptor分别与相互作用的两个生物分子结合，生物分子的结合可以将 Donor 和 Acceptor 拉到足够近的距离，产生能量转移。由于Acceptor的发射光来自于能量转移，所以在实验中不需要将未结合与已结合的分子分开，即不需要洗涤步骤。


HTRF 的优势：

HTRF 是不需要洗涤的ELISA。其优势如下：
· 操作非常简单：空板直接加样，加完即可检测，时间短（加样和孵育2h）
· 体系非常稳定：天内可随时检测，信号基本不变
· 适合珍贵样本：整个实验体系只需20ul
· 均相检测体系：无需包被，免洗ELISA，省时省力
· 数据客观真实：比值处理可有效去除背景荧光，假阳性率和价阴性率低
· 反映样品的实际情况，假阳性假阴性率低，可去除由于天热产物自发荧光引起的背景


HTRF 的能量供体

HTRF的能量供体是铕（Eu）和铽（Tb）的穴状化合物。
在这个穴状化合物里，Eu和Tb被永久地嵌合在一个笼子里，结构非常稳定。
这个结构是由J. M. Lehn's教授发明的，并由此在1987年获得了诺贝尔奖。

穴位化合物结构图


HTRF 的能量受体

HTRF的能量受体也有两种，XL665和d2。它们的光学性质相同，分子量不同。前者分子量为105 KD，实际上就是别藻蓝蛋白（APC）。我们将APC的亚基偶联在一起，使其不能解离，提高了稳定性。后者分子量为1KD，在某些实验中有独特的优势。


HTRF 的操作步骤：

HTRF的操作步骤非常简单，只需要将实验所需试剂加进去，然后孵育、检测即可，如下图所示。


HTRF 检测仪器多样化：

Cisbio与几乎所有的仪器供应商都建立了合作伙伴关系，下面是经过验证的仪器列表。所有这些仪器都标有HTRF®的标志。


HTRF 的应用领域：


应用产品列表：

订购咨询热线：400-021-8158
 

试剂盒

应用

激酶(Kinase)

STK

1、丝氨酸、苏氨酸激酶活性检测
2、抑制剂或激动剂的筛选

TK

1、酪氨酸激酶活性检测
2、抑制剂或激动剂的筛选

ADP Transcreener

激酶、ATP酶活性检测，以及反应中生成ADP的定量

G蛋白偶联受体
(GPCR)

cAMP

1、Gs，Gi类受体激动剂和拮抗剂的筛选
2、PDE酶活性的检测
3、腺苷酸环化酶活性检测
4、受体活性检测

IP-One

1、Gq类受体活性检测
2、受体激动剂和拮抗剂，别构调节剂以及反向激动剂筛选
3、缓慢激动剂的检测

IP-One Elisa

针对科研用户推出的传统的Elisa方法
1、PLC相关受体的活性检测
2、验证GPCR功能

Tag-lite

1、替代同位素做受体配体结合试验2、受体的二聚化试验
2、受体的二聚化实验

磷酸化蛋白

pERK

1、AKT/MAPK通路研究
2、细胞表面受体研究

pAKT

1、AKT/MAPK通路研究
2、细胞表面受体研究

生物标记物
(Kinase)

Amyloid beta1-40

1、Amyloid beta1-40 peptide定量
2、分泌酶活性检测

Apo A1

1、载脂蛋白A1定量
2、核受体活性检测

Apo B

1、载脂蛋白B定量
2、核受体活性检测

cGMP

1、cGMP定量
2、PDE酶活性检测
3、鸟苷酸环化酶活性检测
4、受体活性检测

Cortisol

1、Cortisol定量
2、11β-HSD1活性检测

Estradiol

l、Estradiol定量
2、17β-HSD1活性检测

Histamine

Histamine定量

Insulin

Insulin定量

PEG2

PGE2定量

Sirt1

Sirt1酶活性检测

抗体定量

Total IgG

1、IgG定量
2、带Fc标签蛋白定量
3、人源化抗体筛选
4、抗体生产时的质控

Kappa Mab

1、含Kappa轻链抗体的定量
2、抗体生产时的质控

Lamda Mab

1、含Lamda轻链抗体的定量
2、抗体生产时的质控

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